使用點成LUNA-FX7™自動細胞計數儀進行體細胞計數

1 簡介

體細胞計數（SCC）是乳品行業用于管理乳房健康的一個成熟參數。體細胞計數的增加表明存在乳房內感染（IMI），進而引發乳腺炎。這種情況可能導致受孕率低下并影響牛奶產量。因此奶牛場會使用基于流式細胞術的細胞計數儀，如 FossoMatic。盡管這種方法對于高通量分析很有效，但在研究領域中仍需要一種成本較低的方法來計數小樣本量的細胞。

由于牛奶中存在脂肪和蛋白質碎片，對牛奶中的體細胞計數頗具挑戰性。為了解決這個問題，已開發出體細胞染色液，以便與點成 LUNA-FX7™ 配合，進行簡單直接的體細胞計數。在本文中，我們展示了點成 LUNA-FX7™ 自動細胞計數儀使用體細胞染色液高效計數牛奶中體細胞的能力。

2 材料與方法

從 POSTBIO 公司獲取了高、中、低濃度的生鮮牛奶樣本。只有低濃度樣本的體細胞計數低于每毫升 2×10?個細胞。將每個牛奶樣本與體細胞染色液（產品編號 F23101）按 1:4 的比例混合。使用點成 LUNA-FX7™ 搭配單通道載玻片（產品編號 L72011）進行細胞計數。在熒光細胞計數模式下采用了經過修改的參數配置（表 1）。

3 染色原理

由于牛奶中的脂肪和蛋白質碎片，在明場（BF）通道中進行體細胞計數效果不佳（圖 1A），因為牛奶中的這些碎片在點成 LUNA-FX7™ 可檢測的波長下幾乎沒有熒光信號，所以使用含有碘化丙啶（PI）的體細胞染色液來進行體細胞計數。該染色液還含有一種去污劑，可誘導細胞裂解，碘化丙啶無法穿透完整的細胞。一旦細胞被通透，碘化丙啶就會通過插入堿基對之間與 DNA 結合，結合后其熒光強度會增加 20 至 30 倍。這使得能夠準確區分牛奶中的體細胞和碎片。因此在進行體細胞計數時不會受到牛奶中碎片的干擾。

4 結果

對點成 LUNA-FX7™ 的結果進行了仔細分析和檢查，以確認碘化丙啶標記和識別的體細胞是否準確。從標記圖像中可以看出，點成LUNA-FX7™ 成功區分了牛奶中的體細胞和碎片（圖 1A）。此外，將點成 LUNA-FX7™ 的體細胞計數結果與基于流式細胞術的細胞計數儀的已知濃度進行了比較。結果顯示，兩種不同平臺的結果之間具有很強的相關性（低濃度樣本低于每毫升 2×10?個細胞）（圖 1B）。

表 1.點成 LUNA-FX7™ 熒光細胞計數模式下體細胞計數的優化參數設置

圖 1. （A）該圖像顯示了使用點成 LUNA-FX7™ 成功染色并標記的牛奶樣本中的體細胞。

（B）柱狀圖顯示了點成 LUNA-FX7™ 和基于流式細胞術的細胞計數儀所獲得的體細胞計數數據之間具有很強的相關性。

5 結論

本文證明了點成 LUNA-FX7™ 自動細胞計數儀能夠使用體細胞染色液有效地對體細胞進行計數。同時點成LUNA-FX7™ 和基于流式細胞術的細胞計數儀的體細胞計數結果比較顯示，二者之間具有很強的相關性。因此，點成LUNA-FX7™ 自動細胞計數儀功能多樣，可用于包括體細胞計數在內的多種應用。